คานามัยซินซัลเฟตเป็นยาปฏิชีวนะที่ฆ่าเชื้อแบคทีเรียซึ่งออกฤทธิ์โดยการยับยั้งการสังเคราะห์โปรตีนในจุลินทรีย์ที่อ่อนแอKanamycin sulfate ออกฤทธิ์ในหลอดทดลองกับเชื้อ Staphylococcus aureus หลายสายพันธุ์ (รวมถึงสายพันธุ์เพนิซิลลิเนสและสายพันธุ์ที่ไม่ได้ผลิตเพนิซิลลิเนส), Staphylococcus epidermidis, N. gonorrhoeae, H. influenzae, E. coli, Enterobacter aerogenes, Shigella และ Salmonella species, K. pneumoniae, Serratia marcescens, สายพันธุ์ Providencia, สายพันธุ์ Acinetobacter และสายพันธุ์ Citrobacter freundii และ Citrobacter และสายพันธุ์ Proteus ทั้งสายพันธุ์ indole-positive และ indole-negative ที่มักดื้อต่อยาปฏิชีวนะอื่นๆ